BACKGROUND: Thrombin downregulates endothelial ectonucleotidase activity resulting in high levels of adenosine diphosphate (ADP) and adenosine triphosphate (ATP) which lead to platelet, leukocyte and endothelial activation. Depending on adenosine nucleotide levels, resting platelets inhibit and thrombin-activated platelets increase respiratory burst of neutrophils. Whether the red wine polyphenols quercetin and resveratrol affect thrombin-dependent adenosine nucleotide, metabolism and thrombin-induced signaling is unknown.
MATERIALS AND METHODS: ATP and ADP secretion by platelets, the impact on subsequent oxidative burst activity in neutrophils and CD39/ATPdase function in endothelial cells (ECs)was studied. Cell migration was measured in modified Boyden chambers; adenosine metabolites were quantified by high-performance liquid chromatography (HPLC). Signal transduction was studied by Western blotting.
RESULTS: Quercetin and resveratrol inhibited thrombin-induced ADP and ATP secretion from platelets in a concentration-dependent manner. Augmented respiratory burst of neutrophils in response to thrombin-activated platelets was also inhibited by the two polyphenols as was neutrophil migration toward thrombin-induced supernatants of platelets. Quercetin and resveratrol restored the decreased CD39/ATPdase activity in human umbilical vein endothelial cells, in response to thrombin as demonstrated by adenosine monophosphate (AMP) and adenosine increases in endothelial culture supernatants. Both polyphenols inhibited thrombin-induced MAPK, JNK and focal adhesion kinase activities in endothelial cells.
CONCLUSION: Quercetin and resveratrol interfere with the proinflammatory signaling of thrombin resulting in the inhibition of adenosine nucleotide secretion from activated platelets and decreased neutrophil function. Moreover, the polyphenols protect endothelial adenosine nucleotide metabolism when downregulated by thrombin. These observations may explain cardioprotective effects of grape products.
 

La trombina regula a la baja la actividad ectonucleotidasa endotelial que resulta en altos niveles de adenosina difosfato (ADP) y trifosfato de adenosina (ATP) que conducen a la activación de las plaquetas, leucocitos y la activación endotelial. Dependiendo de los niveles de nucleótidos adenosina, las plaquetas en reposo inhiben la trombina y activan las plaquetas por aumento de estallido respiratorio de los neutrófilos. Si el vino tinto y sus polifenoles quercetina y resveratrol afectan a la adenosina de manera dependiente de la trombina es desconocido.
Se estudió la secreción de ATP y ADP por las plaquetas, el impacto en la actividad posterior a la explosión oxidativa de los neutrófilos y la función CD39/ATPdase en las células endoteliales (EC). La migración celular se mide en cámaras de Boyden modificada; los metabolitos de adenosina fueron cuantificados por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). La transducción de señales se ha estudiado a través de Western Blot.
La quercetina y el resveratrol inhiben la trombina inducida por la secreción de ADP y ATP a partir de las plaquetas de manera dependiente de la concentración. Y al estallido respiratorio de neutrófilos que aumentó en respuesta a las plaquetas activadas por trombina también se inhibió por los polifenoles la migración de neutrófilos hacia la trombina. La quercetina y el resveratrol restauraron la actividad de CD39/ATPdase la disminución en las células endoteliales de la vena umbilical, en respuesta a la trombina, como lo demuestra la adenosina monofosfato (AMP) y aumenta la adenosina. Ambos polifenoles inhiben la trombina inducida por MAPK, JNK y actividades quinasa de adhesión focal en las células endoteliales.
La quercetina y el resveratrol interfieren con la señalización proinflamatoria de la trombina que resulta en la inhibición de la secreción de nucleótidos adenosina de las plaquetas activadas y la disminución de la función de neutrófilos. Por otra parte, los polifenoles protegen el metabolismo endotelial. Estas observaciones pueden explicar los efectos cardioprotectores de los productos de la uva.