BACKGROUND & AIM: The resveratrol analogue piceatannol (3,5,3',4'-tetrahydroxy- trans-stilbene; PICE) is a polyphenol present in grapes and wine. PICE is a protein kinase inhibitor that modifies multiple cellular targets exerting immunosuppressive, antileukemic and antitumorigenic activities in several cell lines and animal models. The present work aims to evaluate the antimelanoma effect of PICE on human melanoma cells for the first time. To this purpose, the pro-apoptotic capacity, uptake and metabolism of PICE as well as its effect on cell cycle and cyclins A, E and B1 expression will be studied.
METHODS: . Human SK-Mel-28 melanoma cells were incubated with PICE (1-200 microM) for 72 hours. Cell cycle and viability were examined using flow cytometry analysis. Apoptosis was determined using the annexin V assay and also by fluorescence microscopy. Cyclins A, E and B1 were detected by Western blotting. Stability, cellular uptake and metabolism of PICE were evaluated using HPLC-DAD-MS-MS.
RESULTS: The lowest PICE concentration assayed (1 microM) increased about 6-fold over the control the apoptotic population of melanoma cells (10.2% at 8 hours which remained constant during 48 h). 100 microM PICE induced 13% apoptosis at 8 h increasing up to 41.5% at 48 h. The decrease in cell viability was highly correlated with the increase of apoptotic cells ( R = 0.996; P < 0.0001) revealing that significant cytotoxic, unspecific effects did not occur in melanoma cells upon incubation with PICE. Cell cycle was arrested at G(2) phase which was supported by the down-regulation of cyclins A, E and B1. Two methyl-PICE derived metabolites, 3,5,4'-trihydroxy-3'-methoxy- trans-stilbene and 3,5,3'-trihydroxy-4'-methoxy- trans-stilbene (corresponding to 36% of the initially PICE added) were excreted by cells to the medium. The same methyl-PICE derivatives were also found inside the cells (0.01% of the initially PICE added; 0.0183 picograms/cell).
CONCLUSION: The antimelanoma properties of dietary piceatannol cannot be ruled out taking into account its fast and potent pro-apoptotic capacity at low concentration (1 microM).
 

El piceatannol un anáñogodel resveratrol (3,5,3 ', 4'-tetrahidroxi-trans-estilbeno; PICE) es un polifenol presente en las uvas y el vino. PICE es un inhibidor de la proteína quinasa que modifica varios objetivos celulares ejerciendo actividades inmunosupresoras, antileucémicas y antitumorales en varias líneas celulares y modelos animales. El presente trabajo tiene como objetivo evaluar el efecto del antimelanoma PICE en las células de melanoma humano por primera vez. Para este fin se estudia la capacidad pro-apoptótica, absorción y metabolismo de PICE, así como su efecto en el ciclo celular y las ciclinas A, E, B1
Las células del melanoma humanas SK-Mel-28 se incubaron con PICE (1-200 microM) durante 72 horas. El ciclo celular y la viabilidad se evaluaron mediante análisis de citometría de flujo. La apoptosis se determinó mediante el ensayo de anexina V y también por microscopía de fluorescencia. Las ciclinas A, E y B1 fueron detectados por Western Blot. La estabilidad, la captación celular y el metabolismo de PICE se evaluaron por HPLC-DAD-MS-MS.
La concentración más baja ensayada PICE (1 microM) aumentó alrededor de 6 veces por el control de la población de apoptosis de las células del melanoma (10,2% a las 8 horas que se mantuvo constante durante 48 h). La disminución de la viabilidad celular fue altamente correlacionada con el aumento de células. No ocurrieron efectos inespecíficos en las células del melanoma cuando se incuban con PICE. El ciclo de la célula fue detenido en G (2), fase que fue apoyada por la baja regulación de las ciclinas A, E y B1. Dos metabolitos derivados PICE metil-, 3,5,4 '-trihidroxi-3'-metoxi-trans-estilbeno y 3,5,3 '-trihidroxi-4'-metoxi-trans-estilbeno (correspondiente al 36% de los inicialmente PICE el original) se excretaron por las células al medio. Los derivados del mismo PICE metil-también se encontraron dentro de las células (0,01% de los inicialmente PICE añadido; 0,0183 picogramos / célula).
Las propiedades antimelanomicas de piceatannol de la dieta no se pueden descartar teniendo en cuenta su rápida y potente capacidad de acciones pro-apoptóticas en bajas concentraciones